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人妖 女優 构成性MLH1基因表不雅突变
人妖 女優错配缔造劣势（dMMR）指四种错配缔造（MMR）卵白中至少一种抒发缺失，主要由三种原因导致：MMR基因胚系突变、体系突变，以及MLH1基因运行子区高度甲基化。林奇轮廓征（Lynch syndrome，LS）又称遗传性非息肉病性结直肠癌（HNPCC），是一种常染色体显性遗传病，频繁由MMR基因胚系突变引起。与MMR基因突变比拟，MLH1甲基化导致的MLH1卵白缺失更为常见。多个指南共同保举，在结直肠癌（CRC）和子宫内膜癌（EC）中，很是的MLH1免疫组织化学（IHC）成果应进行MMR基因胚系检测或肿瘤组织MLH1甲基化检测，甲基化教唆散漫性肿瘤[1-3]。
CRC林奇轮廓征筛查历程[2]
构成性表不雅突变
上述筛查历程选拔MLH1基因甲基化检测，将散漫病例扼杀在MMR基因胚系检测之外。诚然不错缩短筛查本钱，耕种患者的效用性，然则忽略了构成性MLH1基因表不雅突变/甲基化（constitutional MLH1 epimutation/ methylation，也有翻译成结构性/体质性MLH1表突变）这么的荒僻病例。构成性表不雅突变的特征是平日组织中单个等位基因的运行子甲基化和转录失活，外周血淋巴细胞（PBL，中胚层）、平日结肠粘膜（内胚层）、肌肉（中胚层）、口腔粘膜（外胚层）样本中均可能检测到[4]。构成性表不雅突变分为原发性和继发性，原发性表不雅突变莫得较着的连锁序列变化，在减数分裂过程中是可逆的，偶尔以非孟德尔花式传递给下一代，很少与明确的癌症家眷史相关；继发性表不雅突变由DNA序列改变的顺式作用引起，解任孟德尔遗传花式传递[4-7]。构成性表不雅突变可能是嵌合性的，甲基化水平在不同等位基因和组织中具有异质性[4-5]。
MLH1和MSH2基因的构成性表不雅突变已被细目为LS的荒僻病因。MSH2表不雅突变是典型的继发性表不雅突变，是位于MSH2上游17 kb的EPCAM基因3’端胚系缺失的成果[6]。构成性MLH1表不雅突变的分子机制较为复杂，发生在2-3%的突变阴性的疑似林奇家系中[7]。构成性甲基化病例发扬为与MLH1-LS一致的早发性和/或多发性原发肿瘤；也会导致肿瘤出现MLH1缺失、MSI-H和MLH1甲基化，这些特征与常见的散漫病例叠加[8]。
MLH1表不雅突变部队照看[8]
好意思国俄亥俄州的一项转头性照看纳入了Columbus（n=1566）和OCCPI（n=3310）两个CRC部队，入组要领为（1）MLH1缺构怨/或MSI-H，（2）MLH1甲基化，（3）PBL DNA或全血DNA的可用性。使用焦磷酸测序和甲基化特异性多重荧光PCR（MS-qPCR）两种检测要领分析血液DNA样本，任一检测产生的信号高于检测限，既以为样本甲基化阳性。
在Columbus部队中，95例甲基化检测成功，焦磷酸测序与MS-qPCR成果十足一致。有4例（4.2%）检测到构成性MLH1甲基化，会诊时年齿分别为34、36、52和74岁，患者均首发CRC，唯有一例（Columbus-65）有家眷史纪录。患者Columbus-6容许一半的等位基因甲基化，其他3名患者的甲基化水平较低，教唆嵌合性甲基化。
两个部队血液样本中检测到的甲基化
在OCCPI部队中，281例甲基化检测成功，焦磷酸测序与MS-qPCR成果十足一致。有4例（1.4%）检测到构成性MLH1甲基化，年齿分别为20、34、50和55岁，患者均首发CRC，均有不解确的家眷史。3例患者约一半的等位基因甲基化，OCCPI-1血液中具有低水平（4.2%）嵌合甲基化，运行子区c.-93G＞A杂合。取其肿瘤和配对平日结直肠粘膜（NCM）检测，NCM检测到访佛的低水平（2.6%）嵌合MLH1甲基化，在肿瘤中检测到高水平（60.8%）甲基化。MLH1运行子测序披露肿瘤中c.-93G＞A处未甲基化“A”等位基因的杂合性丢失（LOH），行动肿瘤发生的“二次打击”。
OCCPI-1患者NCM和肿瘤检测成果
年齿分层披露年青患者的构成性MLH1甲基化率高。在Columbus和OCCPI部队中，以年齿≤55岁为界，构成性甲基化率分别为75%（3/4）和23.5%（4/17），不错检测到大深广病例。诚然数据不全，然则4例具有BRAF V600E肿瘤检测成果的构成性甲基化患者均为BRAF野生型。与之前的报说念一致，构成性甲基化患者BRAF野生型的频率更高。要是使用BRAF V600E检测代替MLH1甲基化行动MLH1缺失患者的筛查，构成性MLH1甲基化患者会进一步接纳MMR基因胚系检测，并可能产生阴性/无临床道理的检测成果。
Columbus和OCCPI部队中按年齿分辨的构成性MLH1甲基化检出率
代表性照看
除了上述NCCN指南援用的部队照看除外，之前亦有一些对于构成性MLH1表不雅突变的照看或案例报说念，包括原发性和继发性表不雅突变。咱们从中挑选几个代表性照看。
照看一[6]：
法国的一项照看连合大片断PCR和高通量测序（NGS）的要领，照看了4个具有遗传性表不雅突变的家系和10例莫得阐发表不雅突变的患者。家系1检出MLH1 1番外显子3‘终局上游6 bp处AluYc序列的插入，长度为345个核苷酸。这种插入会导致MLH1基因的收敛，提供一个新的剪接供体位点，产生的转录本编码截短卵白。带有Alu插入的等位基因在家系中与甲基化共分离。
家系1披露构成性MLH1表不雅突变的常染色体显性遗传，和插入AluYc序列的1番外显子序列
家系2的先证者为CRC，一级支属莫得癌症病史，发扬出MSI-H和PMS2孑然的卵白抒发缺失，但PMS2基因测序未发现突变。在患者肿瘤和PBL DNA中检测到MLH1运行子甲基化，并在6名无症状支属中飞舞出表不雅突变。使用多重不时探扩增（MLPA）和比较基因组杂交阵列（CGH-array）发现包含EPM2AIP1 基因和 MLH1 1-6番外显子的大片断重复，重复片断大小约29.54 kb，片断两头位于Alu元件中，与甲基化共分离。
家系2披露构成性MLH1表不雅突变的常染色体显性遗传，以及包含 EPM2AIP1 和 MLH1 1-6番外显子的重复
在家系3中检出MLH1 1号内含子上的新发突变c.116+106G＞A，该突变在家系中与甲基化共分离。在10例莫得阐发表不雅突变的患者中，有一例（P4）亦然该突变的捎带者，但其患病和未患病的家属均未检出表不雅突变或c.116+106G＞A突变。家系4检出MLH1 c.27G＞A同义突变，该突变在之前的结肠癌家庭登记（C-CFR）多中心照看中已有报说念[5]。在一例未阐发患者（P5）中也检出该突变，但单倍型与家系4不同。此外，照看还在一例未阐发患者（P3）中检出MLH1 5’UTR区的c.-167delA突变，与甲基化相关。
照看也阐发了基因千里默先于DNA甲基化，抒发进程较低的等位基因更容易甲基化的表面。有些突变自己导致等位基因十足失活，与表不雅遗传千里默无关，运行子甲基化可能行动失活的冗余机制出现。甲基化不错行动转录千里默的相识机制，壅塞细胞转录无功能的等位基因。此外，一些已陶冶证了对剪接功能有影响的突变莫得相关的运行子高度甲基化，这可能与序列改变影响与表不雅遗传修饰元件的连合联系。
照看二[9]：
意大利的一项照看选拔NGS和MS-MLPA等技巧照看了56例患者的61个MLH1缺失肿瘤（CRC的BRAF均为野生型），有4个肿瘤样本的甲基化水平极度高（大于0.9），4例患者的血液DNA均飞舞出构成性MLH1甲基化。
在家系F-5中，两位成员P-09和P-10均捎带MLH1 c.-168_c.116+713del胚系缺失，其罹患的三种肿瘤（2个CRC和1个EC）具有疏导的体细胞甲基化花式。两位患者均为构成性MLH1甲基化捎带者，解说MLH1运行子区的大片断缺失会导致该基因的表不雅遗传千里默，并被界说为继发性表不雅突变。
继发性表不雅突变家系F-5
在家系F-6中，P-38是又名年青女性CRC患者，捎带PMS2 P794S胚系临床道理未明（VUS）突变，组织中检测到高水平的MLH1甲基化，血液中亦检测到甲基化。照看者将这种情况界说为MLH1原发性表不雅突变。三年后，这位患者患上了MLH1劣势的复杂子宫内膜增生。
原发性表不雅突变家系F-6和患者P-38检测成果
指南保举
NCCN遗传性/家眷性高风险评估：结直肠癌、子宫内膜癌、胃癌指南对于构成性MLH1表不雅突变的检测，作念了如下保举[1]：
患者的构成性MLH1表不雅突变是一个荒僻的例外。对于早发性CRC（≤55岁）、无BRAF V600E突变、IHC中MLH1缺失、无胚系MLH1致病/疑似致病突变或任何年齿MLH1运行子高度甲基化的>1个肿瘤患者，接洽转诊到具有基因检测专科学问的机构进行MLH1甲基化检测。
评估构成MLH1表不雅突变选拔血液或其他平日组织样本检测MLH1运行子区甲基化情景。
总结
构成性MLH1甲基化是疑似LS肿瘤不行残忍的机制之一，在MLH1缺失且未发现MMR序列突变的患者中有一定的发生频率，Columbus部队为4.2%，OCCPI部队为1.4%[8]，C-CFR照看为3.8%（16/416）[4]。然则就总体而言，构成性MLH1甲基化在未经弃取的CRC中极为荒僻，Columbus部队为0.26（4/1566），OCCPI部队为0.12%（4/3310）[8]，其并不影响各指南对于MLH1甲基化教唆散漫性肿瘤可能性较大的保举。
对于MLH1卵白抒发缺失的CRC和EC，MLH1基因运行子甲基化检测有助于明确肿瘤的MMR、MSI情景，扼杀林奇轮廓征的风险。此外，MLH1甲基化亦可教唆EC的预后，扶持调养决策的弃取[10-11]，况兼对分子分型也具有补充教唆的作用[12]。飞朔生物的MLH1基因甲基化检测试剂盒选拔MS-qPCR技巧， 滚动后仅需一步操作，可检出甲基化频率低至1%的样本。飞朔骁敢于为肿瘤个体化精确医学检测提供最具改变性的家具和职业，并捏续更新现存家具。
参考文件
[1] NCCN遗传性/家眷性高风险评估：结直肠癌、子宫内膜癌、胃癌2024 v3
[2] CSCO结直肠癌诊疗指南2024
456在线[3] CSCO子宫内膜癌诊疗指南2024
[4] Cancer Med. 2018 Feb;7(2):433-444.
[5] Genet Med. 2013 Jan;15(1):25-35.
[6] Genet Med. 2018 Dec;20(12):1589-1599.
[7] Fam Cancer. 2016 Jul;15(3):385-93.
[8] J Natl Compr Canc Netw. 2023 Jul;21(7):743-752.e11.
[9] Genes (Basel). 2023 Nov 9;14(11):2060.
[10] J Gynecol Oncol. 2021 Nov;32(6):e79.
[11] Cancer. 2022 Mar 15;128(6):1206-1218.
[12] 中华妇产科杂志2023年10月第58卷第10期人妖 女優